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实验员通向实验成功的“弯路”
浏览次数:150发布日期:2021-03-23

作为一只废寝忘食的实验狗走过的路不是来自四面八方的套路而是通向实验成功的弯路

ELISA实验步骤少,流程短,购买的ELISA试剂盒也都有引导性很强的操作说明书,单次实验3-6小时即可得到结果,实验小白也可以很快的上手。但是,各位同学可不要这样就轻视哦~,ELISA和WB、IHC等基础免疫实验一样,都是易学难精,上手容易,但想要得到稳定的结果,不好好做些准备可是不行的哦~

 

夹心法ELISA实验中的捕获抗体和检测抗体是同一个抗体么?

不是的,在双抗夹心法ELISA实验中,会同时用到捕获抗体和检测抗体,这两个抗体是针对同抗原蛋白的不同抗原位点的两种抗体,这样才可以同时结合抗原分子。这也是双抗夹心法ELISA不适用与小分子抗原和半抗原等待测指标的原因。

 

 后面显示的OD值在多少之间属于可用值,有要求吗?

有的,建议标准曲线越浓度 点的OD值在2.0左右较好,也可参考说明书标曲的数据。

 

标准曲线在推荐的浓度下,r2值为0.9,做了多次都是这样,怎么办?

这种情况首先要仔细核对产品说明书,看是否用了推荐的拟合方法,如纪宁生物ELISA试剂盒,需要使用直线、二项式、四参数拟台方式进行拟合,用错拟合方式,会导致r2值较低;如拟合方式无误,需检查是否有个别标曲孔数值异常,排查实验过程中是否出现污染或标准品倍比稀释时出现失误,导致加样不准。

 

副孔差别比较大,是没洗干净吗?

复孔值差异较大,主要原因应考虑加样是否准确,洗板过程中是否有残留以及是否有交叉污染。加样应注意移液器量程,以及枪头残留问题;洗板过程应注意不要有残留液体,需要进行拍干操作;孵育过程要更换封板膜,拍干过程要换吸水纸,避免交叉污染。

 

ELISA可以检测胞内蛋白么?

可以的,大部分ELISA指标均为炎症因子、趋化因子等分泌类型蛋白支撑的样本类型也多为血清、血浆、细胞培养上清等液体样本。如需检测胞内蛋白,首先需要确认待测指标是否在胞内表达,然后选用支撑组织匀浆样本的ELISA试剂盒即可,将组织样品或细胞样品进行裂解,提取胞内蛋白后进行蛋白定量,保证每孔上样总蛋白量一致即可。

 

同一样品多次ELISA检测,测试结果差异大怎么解决?

应考虑的问题包括:

●样本保存不当,会导致多次实验结果偏差较大,样本应尽量减少反复冻融如需多次检测,需在取样后分装保存;

●样品冻融之后未混匀,应混匀后再上样;

●加样不准确,微量样品加样时要注意移液器枪头不要有残留。

 

检测样本是细胞培养上清,那么细胞数目对炎症因子的浓度有影响吗?

有影响,所以不同样本可以比较的前提条件是培养细胞数水平接近一致。 因不同处理, 可能会导致细胞生产状态不同,要保证在铺板时接种细胞数量水平一致。

 

整个过程需要避光吗?避光需要避到什么程度呢?

ELISA实验中。在酶标抗体孵育, 以及显色底物孵育这两步建议避光其他步骤无需避光。避光可采用封板膜覆盖, 或将整个ELISA板子放入暗盒或抽屉等无光处即可。

 

封板膜什么时候用?每次加液后都要换吗?

封板膜在孵育样品、检测抗体以及HRP酶标抗体时都要盖好封板膜, 减少挥发及污染几率。每次使用后要更换新的封板膜。

 

ELISA实验中的洗板步骤如果没有洗板机,需要如何操作?

实验室ELISA实验做的较多,还是建议使用洗板机洗板,效果更好,也更方便控制。如果没有洗板机,在洗板过程中,需要注意洗板液添加后不要从孔中溢出, 在加洗板液后, 静置1-2min,甩干液体后,在吸水纸上大力拍干;重复三次。

 

配好的抗体没用完如何保存,可保存多久?预实验用了个试剂盒里面的部分板子和试剂,剩下的板子和试剂还能继续用于正式实验吗?

针对纪宁生物的ELISA试剂盒来讲,在说明书中有各组分拆开后的保质期, 配好的母液和拆封的板子,可以在四度保存,保质期为一个月左右。剩下的板子和试剂在保质期内是可以继续用于正式实验的,为保证实验质量, 还是建议间隔时间不要太长,周之内更好,需注意试剂避免污染,板子保持干燥。

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